I dturgnaimh PCR (imoibriú slabhrúil polaiméaráise), is cosúil go bhfuil pacáistiú simplí, ach bíonn tionchar díreach aige ar chobhsaíocht imoibrí, éascaíocht úsáide, agus torthaí iontaofa. Cibé an bhfuil sé ag stóráil agus ag iompar saotharlann - imoibrithe ullmhaithe nó réamhtheachtaí tráchtála, is féidir le máistreacht a dhéanamh ar theicnící pacáistithe cuí PCR earráidí coitianta a sheachaint agus éifeachtúlacht thurgnamhach a fheabhsú. Anseo thíos, roinnimid leideanna praiticiúla maidir le roghnú ábhair, straitéisí pacáistithe, agus sonraí stórála.
I. Roghnú Ábhar Pacáistithe: Comhoiriúnacht agus Cosaint a chur in ord tosaíochta
Tá imoibrithe PCR íogair maidir le teocht, solas, agus ábhar salaithe, mar sin ní mór do ábhair phacáistithe trí phríomhriachtanas a chomhlíonadh: aerdhíonacht, solas - promhadh, agus támh ceimiceach.
Maidir le feadáin lártheifneora agus plátaí PCR, is fearr polapróipiléin (PP), mar gheall ar a thrédhearcacht ard agus a DNase/RNase - Airíonna saor in aisce . 0.2 ml tanaí - Tá an t -aistriú pCR níos fearr le haghaidh aistrithe teasa rapid, cé go bhfuil an t -aistriú tiús rapid, cé go bhfuil an t -aistriú tiubhaithe. Le haghaidh plátaí PCR 96 {-, molaimid dearadh sciorta a roghnú (ar mhaithe le cúbláil róbatach) nó dearadh neamh-sciorta (do chaomhnú spáis).
Modh Séalaithe: Baineann feadáin lártheifneora thraidisiúnta úsáid as caipíní cothrom nó ardaithe (chun galú agus triomú a chosc). Mar sin féin, i gcás stóráil fhada - Téarma, moltar scannán teas {- a shéalú (mar shampla parafilm) nó scannán breathable (mar aeraseal) chun brú inmheánach agus seachtrach a chothromú. Moltar plátaí PCR chun sealers scragall alúmanaim ghreamaitheach a úsáid (ard {- frithsheasmhach in aghaidh teochta) nó scannán greamaitheach féin - (le haghaidh úsáid singil {{}}).
Cosaint Solais: Ba chóir imoibrithe ina bhfuil solas - comhábhair íogaire (mar shampla ruaimeanna nó primers áirithe) a fhilleadh i scragall alúmanaim, nó ba chóir plátaí PCR dubh (atá ar fáil ó roinnt monaróirí) a úsáid.
Ii. Teicnící Aliquoting: Caillteanais a íoslaghdú ó reo arís agus arís eile - Timthriallta leá
Is céim lárnach i bpacáistiú PCR é imoibrithe a athlonnú agus bíonn tionchar díreach acu ar in -atáirgtheacht thurgnamhach.
Máistir -mheascán a aliquoting: Moltar do mheascáin mháistir tráchtála (mar shampla einsím taq agus meascán DNTP) a bheith aliquated bunaithe ar an toirt imoibriúcháin móide corrlach 5% - (m.sh., le haghaidh imoibriú 20 μl, aliquot 22 μl in aghaidh an fheadáin). Seachain úsáid go díreach ó phacáistiú mórchóir, mar a dhéantar reo arís agus arís eile - Timthriallta a bheith mar thoradh ar ghníomhaíocht einsím laghdaithe (is féidir le einsím TAQ thart ar 5% gníomhaíocht a chailleadh in aghaidh an timthrialla reo-leá).
Moltar primers agus teimpléid: primers (go háirithe primers saincheaptha) a bheith aliquated ó 100 μm tuaslagán stoic agus a stóráil ag - 20 céim. Caolaigh le tiúchan oibre (0.1–1 μm de ghnáth) sula n -úsáidtear é. Ba chóir teimpléid amhail DNA géanómach a aliquoted i gcainníochtaí aonair {- chun tras-éilliú a sheachaint.
Leideanna um Chosc ar Éilliú: Cinntigh go bhfuil feadáin lártheifneora tirim sula ndéantar iad a mhaolú (is féidir le eatánól iarmharach bac a chur ar PCR), réamh - leideanna pípéad fionnuar chun cosc a chur ar imoibrithe fuar cloí leis an mballa, agus lámhainní a chaitheamh ar fud an phróisis iomláin chun éilliú DNA craicinn a sheachaint.
Iii. Lipéadú agus Taifeadadh: Seachain an gaiste "Bosca Dubh"
Tá lipéadú soiléir ríthábhachtach do phacáistiú PCR; Is féidir le lipéadú mícheart an turgnamh iomlán a mhilleadh.
Faisnéis lipéadaithe éigeantach: Ainm imoibrí (EG, "2 × TAQ Mastermix"), tiúchan/ábhar (m.sh.
Lipéadú Speisialta: Má tá gliocról (antifreeze), ruaimeanna (m.sh., SYBR glas), nó breiseáin (m.sh., BSA), ní mór faisnéis bhreise a sholáthar (m.sh.
Sioncrónú Taifead: Moltar bogearraí bainistíochta scarbhileog nó saotharlainne (m.sh., Labguru) a úsáid chun paraiméadair mhionsonraithe ábhair gach feadáin a thaifeadadh (m.sh. seicheamh primer, luach TM) agus iad a nascadh leis an uimhir lipéad fhisiciúil.
Iv. Stóráil agus iompar: Teocht agus cosaint fhisiciúil a chothromú
Tá cobhsaíocht na n -imoibrithe PCR ag brath go mór ar choinníollacha stórála, agus tá gá le cosaint bhreise le linn iompair.
Stóráil Ghinearálta:
Einsímí (TAQ, Aischur Trasscríbhinn): Long {- stóráil téarma ag {- 20 céim (seachain timthriallta reo -leá arís agus arís eile;
Primers/Probes: Stóráil ag -20 céim ar feadh níos mó ná bliain amháin (má tá grúpa modhnaithe ar nós biotin ann, a chosaint ó sholas);
Non {- Maoláin einsímí (m.sh., PBS): Short {- stóráil téarma ag céim 4 (suas le 1 mhí).
Riachtanais Iompair:
Maidir le hiompar slabhra fuar, bain úsáid as oighear tirim ({- 78 céim) le haghaidh einsímí (a choinnítear faoi bhun -20 céim), agus oighear gorm (thart ar 0 chéim) le haghaidh maoláin le haghaidh iompair ghearrthéarmacha.
Seachain creathadh iomarcach (ba chóir plátaí PCR a dhaingniú i mboscaí cúir chun meascadh imoibrithe idir toibreacha a chosc).
Le linn teochtaí arda an tsamhraidh, cuir ciseal inslithe leis an bpacáistiú (m.sh., mála inslithe scragall alúmanaim + pacáiste glóthach reoite).
V. Fadhbanna agus réitigh choitianta
Fadhb 1: deascadh imoibrí (m.sh. DNTPS nó MGCL₂ deascadh ag teochtaí ísle) → Réiteach: Lártheifneoir go hachomair (1000 rpm, 1 nóiméad) sula ndéantar iad a chothú. Díscaoileadh i ngoradán 37 céim sula n -úsáidtear é agus vortex chun meascán maith a mheascadh.
Fadhb 2: sealer pláta go héasca as → tuaslagán: Roghnaigh teas {- sealer frithsheasmhach le tacaíocht ghreamaitheach, nó bain úsáid as sealer teasa (oiriúnach do thurgnaimh tréchuir ard -).
Fadhb 3: Lipéid doiléire → Réiteach: Bain úsáid as marcóir uiscedhíonach (mar shampla Sharpie) nó léasair - lipéid phriontála chun cosc a chur ar lámhscríbhneoireacht ó alcól a scriosadh.
Deireadh
Tá pacáistiú PCR níos mó ná imoibrithe “pacáistithe” amháin; Is é seo an chéad líne chosanta le haghaidh iontaofachta turgnamhaí. Trí ábhair chuí a roghnú, an próiseas aliquoting a chaighdeánú, lipéadú críochnúil a chothabháil, agus rialú teochta dian a choinneáil le linn iompair, is féidir leat earráid dhaonna a laghdú go suntasach, ag cinntiú imoibrithe aimplithe níos cobhsaí agus torthaí níos iontaofa. Cuimhnigh: Sonraí Socraigh an rath. Is féidir le cleachtais phacáistithe PCR cuí fabhtcheartú ama suntasach a shábháil le linn do thurgnaimh ar fad!